专题2 微生物的培养与应用--2012广东澤穎知网

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课题1 微生物的实验室培养
1.培养基
   1．1培养基的类型及其应用：
标准 培养基类型 配制特点 主要应用
物理性质 固体培养基 加入琼脂较多 菌种分离,鉴定,计数
 半固体培养基 加入琼脂较少 菌种保存
 液体培养基 不加入琼脂 工业生产，连续培养
目的用途 鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别
 选择培养基 添加（或缺少）某种化学成分 菌种的分离
1．2 培养基的化学成分包括： 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 四类营养成分。
1．3 培养基还需要满足微生物生长的： pH 、 特殊营养物质 和 氧气 等要求。
1．4 获得纯净培养物的关键：是 防止外来杂菌的入侵 。☆
1．5 无菌技术包括：P15（1）（2）（3）（4）
1．6 比较消毒和灭菌（填表）
比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭
消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能
灭菌 强烈 全部微生物 能
〖思考1〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是 防止感染实验操作者 。
1．7 消毒方法：P15\16
（1）煮沸 ；（2）巴氏 消毒法；（3）石炭酸或煤酚皂 \ 紫外线。（4）酒精；（5）氯气。
1．8灭菌方法：P16（1）灼烧 ；（2）干热 ；（3）高压蒸汽  。（4）紫外线 。
〖思考2〗对接种环灭菌时要用酒精灯的 充分燃烧 层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。
〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。
〖思考4〗物品装入→首先打开排气阀→关闭排气阀继续加热，气压升至 100k Pa，温度为 121℃ ，并维持 15～30 min；→最后切断热源，使温度自然降温。
2．实验操作
2．1 计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。
2．2 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。
2．3 溶化：①牛肉膏→②加蛋白胨和氯化钠→③琼脂→④定容到100mL。（不断用玻棒搅拌）
2．4 调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。
2．5 灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。
2．6 倒平板：待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：
①左手拔出棉塞；→②瓶口迅速通过火焰；→③打开一条缝隙，倒入培养皿→④冷却后倒过来。
〖思考1〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。
〖思考2〗倒平板的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
〖思考3〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
〖思考4〗配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是保持通气并防止杂菌感染。
〖思考5〗试管培养基形成斜面的作用是增大接种面积。
☆2．7 接种：最常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法。（还有穿刺接种和斜面接种等。）
2．7．2平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：P18：①烧红。②打开棉塞。③试管口通过火焰。④取出一环菌种。⑤再次通过火焰后塞上棉塞。⑥划3～5条平行线。⑦末端开始划线。⑧倒置培养。
〖思考6〗取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
〖思考7〗在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。
2．7．3　稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即