专题5 DNA和蛋白质技术---2012广东澤穎知网

专题5  DNA和蛋白质技术---2012广东澤穎知网

课题1  DNA的粗提取与鉴定

☆基础知识

提取生物大分子的基本思路：用一定的物理或化学方法

分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。

提取DNA的原理：包括DNA的溶解性和耐受性两个方面。

1．DNA粗提取的原理

⑴DNA的溶解性

     ①DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为O.14 mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。

    ②DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。进一步提取出含杂质较少的DNA。

⑵利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。

①蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。

②温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA在80℃以上才会变性。

③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响，从而瓦解细胞膜。

2.DNA的鉴定原理：DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。

3.操作步骤，明确目的：

①防止血凝。 ②加速血细胞破裂。③溶解DNA。④使2 moI/L的NaCI溶液稀释至O.14 mol/L，促DNA最大限度地析出。⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上。⑥使含DNA的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。⑦除去含DNA的滤液中的杂质。⑧提取DNA。⑨A：出现蓝色。B：无变化

☆关键步骤：④a.注蒸馏水要慢，防过量而使DNA重新溶解(把握浓度达O.14 mol/L)。b.轻轻沿同一方向搅拌，有利于DNA析出、附着、缠绕。 ⑥再溶解DNA黏稠物并过滤。用浓度为2mol/L的NaCl溶液。

⑧用预冷的95％的酒精。因其a.可抑制核酸水解酶活性，防止降解。b.降低分子运动，易析出沉淀。C.低温利于增加DNA柔韧性，减少断裂。如果出现的丝状物较少，可以将此混合液再放人冰箱中冷却几分钟。浓缩后的DNA丝状物，可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附DNA的作用)。 

小结：选择材料→破碎细胞→DNA的溶解和析出→DNA的纯化→DNA的鉴定

课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段

1．基础知识

1．1☆比较生物体内DNA复制与PCR反应的区别